Fluorescenční barví jsou sloučeniny se speciálními strukturami a jejich konstrukční vlastnosti zahrnují především následující tři body:
(1) Molekula obsahuje skupinu emitující fluorescenční emise, jako je karbonylová skupina, dvojitá vazba dusíku a dusíku, dvojitá vazba uhlík-dusík atd.
(2) Molekula obsahuje auxochromové skupiny. Auxochromová skupina posune spektrum červeně a zvyšuje účinnost fluorescence, jako je primární skupina aminokyselin, sekundární skupina aminokyselin, hydroxylová skupina, éterová vazba, amidová skupina a tak dále.
(3) Molekula obsahuje konjugované π vazby s tuhou homární strukturou. Čím větší je intramolekulární konjugovaný systém, tím silnější je planarita, tím vyšší je intenzita fluorescence. Některé faktory, které mohou zlepšit stupeň konjugace, mohou zvýšit účinnost fluorescence a posunout vlnovou délku fluorescence na směr dlouhé vlny.
